需综合临床表现、X线表现及血清学检查结果作出诊断。培养分离出肺炎支原体虽对诊断有决定性意义，但其检出率较低，技术条件要求高，所需时间长。血清学试验有一定参考价值。本病应与病毒性肺炎、军团菌肺炎等鉴别。周围血嗜酸性粒细胞正常，可与肺嗜酸性粒细胞浸润相鉴别。
[实验室和其他检查]  X线显示肺部多种形态的浸润影，呈节段性分布，以肺下野为多见，有的从肺门附近向外伸展。病变常经3～4周后自行消散。部分患者出现少量胸腔积液。血白细胞总数正常或略增高，以中性粒细胞为主。起病2周后，约2／a的患者冷凝集试验阳性，滴度大于1：32，如果滴度逐步升高时，更有诊断价值。约半数患者链球菌MG凝集试验阳性。凝集试验为诊断肺炎支原体感染的传统实验方法，但其敏感性与特异性均不理想。血清支原体IgM抗体的测定(酶联免疫吸附试验最敏感，免疫荧光法特异性强，间接血凝法较实用)可进一步确诊。直接检测标本中肺炎支原体抗原，可用于临床早期快速诊断。单克隆抗体免疫印迹法、核酸杂交技术及PCR技术等具有高效，特异而敏感等优点，易于推广，对诊断肺炎支原体感染有重要价值。

[诊断与鉴别诊断] 需综合临床表现、X线表现及血清学检查结果作出诊断。培养分离出肺炎支原体虽对诊断有决定性意义，但其检出率较低，技术条件要求高，所需时间长。血清学试验有一定参考价值。本病应与病毒性肺炎、军团菌肺炎等鉴别。周围血嗜酸性粒细胞正常，可与肺嗜酸性粒细胞浸润相鉴别。